Sf9 昆蟲(chóng)宿主細(xì)胞殘留蛋白(HCP)檢測(cè)試劑盒是用來(lái)定量分析以昆蟲(chóng)Sf9細(xì)胞(為表達(dá)細(xì)胞的生物藥物中宿主蛋白雜質(zhì)的試劑盒。首先,用不同濃度的sf9標(biāo)準(zhǔn)蛋白制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)分析生物藥物中宿主細(xì)胞殘留蛋白的含量。具體方法為:先將sf9標(biāo)準(zhǔn)蛋白或者待測(cè)樣品適當(dāng)稀釋后加入已包被好抗sf9宿主蛋白抗體的96孔平板中。經(jīng)過(guò)1.5小時(shí)的保溫,宿主細(xì)胞蛋白與已經(jīng)固定在平板上的抗體結(jié)合形成抗原-抗體復(fù)合物。此復(fù)合物被隨后加入的生物素標(biāo)記的抗sf9宿主蛋白的抗體結(jié)合并進(jìn)一步形成更高級(jí)的復(fù)合物,反應(yīng)45分鐘后洗去未結(jié)合的物質(zhì)。再加入鏈霉親合素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物,靜置30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標(biāo)記的抗體相結(jié)合,從而使鏈霉親合素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物連接到平板上。接下來(lái)沖洗掉未結(jié)合的物質(zhì),加入TMB底物。固相上的酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),待顏色反應(yīng)一段時(shí)間后,終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其結(jié)果,此結(jié)果能間接地反應(yīng)結(jié)合到平板上的的宿主細(xì)胞蛋白數(shù)量的多少。根據(jù)sf9宿主蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲定量分析生物藥物中宿主細(xì)胞殘留蛋白的含量。
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