HEK 293T宿主蛋白酶聯(lián)檢測試劑盒是用來定量分析以HEK 293T為表達細胞的生物藥物中宿主蛋白雜質的試劑盒。首先,用不同濃度的HEK 293T標準蛋白制作一條標準曲線,然后再根據標準曲線來分析生物藥物中宿主細胞殘留蛋白的含量。具體方法為:先將HEK 293T標準蛋白或者待測樣品適當稀釋后加入已包被好抗HEK 293T宿主蛋白抗體的96孔平板中。經過1.5小時的保溫,宿主細胞蛋白與已經固定在平板上的抗體結合形成抗原-抗體復合物。此復合物被隨后加入的生物素標記的抗HEK 293T宿主蛋白的抗體結合并進一步形成更高級的復合物,反應45分鐘后洗去未結合的物質。再加入鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復合物,靜置30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標記的抗體相結合,從而使鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復合物連接到平板上。接下來沖洗掉未結合的物質,加入TMB底物。固相上的酶催化底物產生顏色反應,待顏色反應一段時間后,終止反應。用酶標儀在450 nm波長下測定其結果,此結果能間接地反應結合到平板上的的宿主細胞蛋白數量的多少,根據HEK 293T宿主蛋白標準曲定量分析生物藥物中宿主細胞殘留蛋白的含量。
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